Roy Dupuis, 21 Nisan 1963 tarihinde Kanada'nın New Brunswick eyaletinde doğmuştur. Fransızca konuşan bir ailede büyüyen Dupuis, genç yaşlardan itibaren sahne sanatlarına ilgi duymaya başlamıştır. Montreal'deki Conservatoire d'art dramatique'te eğitim aldıktan sonra, kariyerine tiyatroda başlamış ve kısa sürede televizyon ve sinema dünyasında da kendine yer edinmiştir.

Dupuis, özellikle "La Femme Nikita" adlı televizyon dizisindeki Michael rolü ile uluslararası alanda tanınmıştır. Bu dizi, 1997-2001 yılları arasında yayınlanmış ve Dupuis'in kariyerinde önemli bir dönüm noktası olmuştur. Dizi, aksiyon ve dram unsurlarını bir araya getirerek büyük bir hayran kitlesi oluşturmuştur. Bunun yanı sıra, "Les Filles de Caleb" ve "Les Invincibles" gibi diğer popüler dizilerde de rol almıştır.

Roy Dupuis, sinema kariyerinde de birçok önemli projede yer almıştır. "Seducing Doctor Lewis" 2003 ve "The Last Escape" 2004 gibi filmlerdeki performanslarıyla dikkat çekmiştir. Ayrıca, "La Grande Séduction" 2003 adlı filmdeki rolü, onu daha geniş bir izleyici kitlesine tanıtmıştır. Dupuis, hem dramatik hem de komedi türündeki yapımlarda gösterdiği performanslarla beğeni toplamıştır.

Dupuis'in kariyeri boyunca birçok ödül kazanmıştır. 1997 yılında "Gemini Ödülleri"nde En İyi Erkek Oyuncu dalında ödül almış, 2001 yılında ise "Jutra Ödülleri"nde En İyi Erkek Oyuncu ödülüne layık görülmüştür. Ayrıca, kariyeri boyunca birçok festivalde aday gösterilmiş ve çeşitli ödüller kazanmıştır. Bu başarıları, onun yeteneğini ve Kanada sinemasındaki önemli yerini pekiştirmiştir.

Roy Dupuis, kariyeri boyunca hem televizyon hem de sinema alanında önemli projelerde yer alarak, Kanada'nın en tanınmış ve saygın oyuncularından biri haline gelmiştir. Hem oyunculuk yeteneği hem de sahne karizması ile izleyicilerin gönlünde taht kurmayı başarmıştır.